經(jīng)皮水分流失測量儀：副干乳桿菌與酵母菌混合培養(yǎng)物的免疫調(diào)節(jié)作用

2025年，Tomoki Fukuyama團(tuán)隊(duì)在《Biomedcines》期刊上發(fā)表了一項(xiàng)題為“Topical Administration of a Mixed Microbial Culture of Lactobacillus paracasei,Pichia membranifaciens and Saccharomyces cerevisiae Significantly Inhibits the Development of Atopic Dermatitis in a Mouse Model Through IL-10 over Expression by Dendritic Cells"的研究。該研究探討了由副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母和釀酒酵母組成的混合微生物培養(yǎng)物（LS）對特應(yīng)性皮炎（AD）小鼠模型的影響，重點(diǎn)評估其免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用。

摘要

背景：本研究聚焦于一種由副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母和釀酒酵母組成的混合微生物培養(yǎng)物（LS）作為新型益生菌，探討其在特應(yīng)性皮炎（AD）小鼠模型中通過皮膚給藥的療效。

方法：使用小鼠樹突狀細(xì)胞系（DC2.4）檢測LS的免疫調(diào)節(jié)作用，測定IL-10和TNFα的水平。在刺激狀態(tài)下的人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）中，評估LS對IL-8和TARC產(chǎn)生的抑制作用。最后，在通過局部致敏誘導(dǎo)的AD小鼠模型中，觀察LS（10%）局部給藥的干預(yù)效果。結(jié)果：LS顯著促進(jìn)DC2.4細(xì)胞分泌IL-10和TNFα，并顯著抑制HaCaT細(xì)胞中IL-8和TARC的產(chǎn)生。在AD小鼠模型中，LS雖未顯著改善臨床癥狀，但降低了局部淋巴結(jié)中IgE陽性B細(xì)胞數(shù)量和IL-4水平。預(yù)防性使用LS可明顯減輕AD癥狀。

結(jié)論：LS具有免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用，可用于預(yù)防AD的發(fā)生。

材料與儀器

材料：副干酪乳桿菌、膜畢赤酵母、釀酒酵母混合培養(yǎng)物、細(xì)胞系、培養(yǎng)基、胎牛血清（FCS）、青霉素-鏈霉素、重組人TNFα、IFNγ、ELISA試劑盒、抗體

儀器：流式細(xì)胞儀、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、ASCH AS-VT100RS VAPO SCAN經(jīng)皮水分流失測量儀

ASCH AS-VT100RS VAPO SCAN經(jīng)皮水分流失測量儀

實(shí)驗(yàn)過程

1 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)

使用小鼠樹突狀細(xì)胞系（DC2.4）和人表皮角質(zhì)形成細(xì)胞系（HaCaT）進(jìn)行體外實(shí)驗(yàn)。將DC2.4細(xì)胞與不同濃度（0-1 mg/mL）的LS混合微生物培養(yǎng)物共培養(yǎng)，檢測IL-10和TNFα的分泌水平。將HaCaT細(xì)胞先用TNFα和IFNγ刺激1小時(shí)，再加入不同濃度的LS共培養(yǎng)24小時(shí)，檢測IL-8和TARC的分泌水平。所有細(xì)胞因子濃度均使用ELISA試劑盒測定。

2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

使用NC/Nga小鼠建立特應(yīng)性皮炎（AD）模型，通過涂抹屋塵螨提取物（Biostir AD）誘導(dǎo)皮炎。實(shí)驗(yàn)分為治療性實(shí)驗(yàn)和預(yù)防性實(shí)驗(yàn)兩部分：

治療性實(shí)驗(yàn)：從AD誘導(dǎo)后第19天開始，每日在小鼠背部皮膚涂抹10% LS溶液（0.1 mL/只），對照組涂抹蒸餾水。每周評估AD臨床評分、背部皮膚厚度和經(jīng)皮水分流失量（TEWL）。

圖1 在預(yù)防性實(shí)驗(yàn)中，與AD對照組相比，LS局部給藥降低了（A）AD臨床評分，但（B）皮膚厚度和（C）經(jīng)皮水分流失量（TEWL）未見變化。（D）皮膚病變的代表性宏觀圖像和（E）受累皮膚的組織學(xué)切片（比例尺 = 100 μm）。LS給藥減少了耳廓淋巴結(jié)中（F）CD3+CD4+CD44+CD62L?效應(yīng)T細(xì)胞的數(shù)量，但對（G）CD19+IgE+ B細(xì)胞或（H）CD11c+樹突狀細(xì)胞無影響。細(xì)胞因子方面，（I）IL-4水平降低，而（J）IL-13和（K）IL-17水平未見變化。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）表示。各組樣本量：未處理組（n = 1），AD對照組（n = 6），LS處理組（n = 7）。** p < 0.01（Student's t檢驗(yàn)）與AD對照組比較。AD，特應(yīng)性皮炎；TEWL，經(jīng)皮水分流失量。

預(yù)防性實(shí)驗(yàn)：在AD誘導(dǎo)前即開始每日涂抹10% LS溶液，后續(xù)監(jiān)測指標(biāo)同治療性實(shí)驗(yàn)。

3 樣本分析

實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，收集小鼠耳廓淋巴結(jié)，制備單細(xì)胞懸液。使用流式細(xì)胞儀分析T細(xì)胞、B細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞的亞群變化。將淋巴結(jié)細(xì)胞用CD3/CD28磁珠刺激24小時(shí)，收集上清液檢測IFNγ、IL-4、IL-13和IL-17水平。同時(shí)取背部皮膚進(jìn)行組織病理學(xué)檢查，評估表皮增生、角化、結(jié)痂及炎癥細(xì)胞浸潤程度。

4 數(shù)據(jù)分析

體外實(shí)驗(yàn)使用方差分析（ANOVA）后接Dunnett檢驗(yàn)，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)使用Student's t檢驗(yàn)或雙因素ANOVA后接Sidak檢驗(yàn)。p < 0.05視為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SEM）表示，使用GraphPad Prism 10軟件分析。

實(shí)驗(yàn)結(jié)論

LS通過上調(diào)樹突狀細(xì)胞的IL-10表達(dá)，表現(xiàn)出免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用。在AD小鼠模型中，預(yù)防性局部使用LS可抑制AD癥狀的發(fā)展，提示其在人類和伴侶動(dòng)物中具有預(yù)防AD的潛力。

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